在外科病理实验中,良好的HE切片对正确诊断至关重要,尤其对淋巴组织病变更为重要,良好的细胞形态学细节对诊断及分型很重要。质量好的HE染色可见3种红色(大红、粉红和紫红)显示色彩亮丽、对比鲜明及细腻的细节;可显示单个细胞周围无收缩间隙,核染色质清晰。切片厚度4um能较好评估组织结构,可显示细胞形态学细节。
一、影响HE染色切片的主要因素
1、组织固定与处理:
(1)缓冲液
(2)及时固定(大标本需要切开)
(3)组织处理过程中充分脱水(小组织脱水时间需要缩短,否则导致细胞收缩)
2、组织切片
(1)蜡块切片前充分水化
(2)石蜡切片在水中充分展开
(3)薄切,切片厚度一致无刀痕。切片厚难以识别细胞形态学细节
3、HE染色
(1)苏木素染色充分
(2)酸性酒精分化很重要(0.3%,不要太浓也不要太稀)
(3)伊红染色充分,酒精稀释可导致红色显色减弱
(4)不同类型的苏木素决定酸性粘液能否上色(mayer苏木素不能染酸性粘液,可导致重要信息丢失)
4、脱水与封片:染色后干片(如用电吹风、烤箱和高温室进行加热干片,而非用二甲苯)导致明显的细胞变形。染色后十片不仅影响HE切片,而且影响免疫染色切片
一张差的HE染色切片不能通过免疫组化、分子检测等其他技术得到弥补。欠佳的HE切片影响正确诊断和分类,导致许多重要的组织学形态细胞丢失。若存在问题,需要复阅HV染色切片,与技术员共同探讨改善HE染色切片质量。
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